পণ্য
২০১৯-এনসিওভির জন্য লাইফকসম SARS-Cov-2-RT-PCR সনাক্তকরণ কিট
প্রত্যাশিত ব্যবহার
এই কিটটি থ্রোট সোয়াব, ন্যাসোফ্যারিঞ্জিয়াল সোয়াব, ব্রঙ্কোঅ্যালভিওলার ল্যাভেজ ফ্লুইড, স্পুটাম ব্যবহার করে নতুন করোনাভাইরাস (2019-nCoV) এর গুণগত সনাক্তকরণের জন্য ব্যবহৃত হয়। এই পণ্যটির সনাক্তকরণ ফলাফল শুধুমাত্র ক্লিনিকাল রেফারেন্সের জন্য, এবং এটি ক্লিনিকাল রোগ নির্ণয় এবং চিকিৎসার একমাত্র প্রমাণ হিসাবে ব্যবহার করা উচিত নয়। রোগীর ক্লিনিকাল প্রকাশ এবং অন্যান্য পরীক্ষাগার পরীক্ষার সাথে সমন্বয় করে অবস্থার একটি বিস্তৃত বিশ্লেষণ করার পরামর্শ দেওয়া হয়।
পরিদর্শন নীতি
এই কিটটি এক-পদক্ষেপ RT-PCR প্রযুক্তির উপর ভিত্তি করে তৈরি। প্রকৃতপক্ষে, ২০১৯ সালের নতুন করোনাভাইরাস (২০১৯-nCoV) ORF1ab এবং N জিনগুলিকে অ্যামপ্লিফিকেশন টার্গেট অঞ্চল হিসেবে নির্বাচিত করা হয়েছিল। নমুনাগুলিতে ২০১৯ সালের নতুন ধরণের করোনাভাইরাস RNA সনাক্ত করার জন্য নির্দিষ্ট প্রাইমার এবং ফ্লুরোসেন্ট প্রোব (N জিন প্রোবগুলিকে FAM দিয়ে লেবেল করা হয় এবং ORF1ab প্রোবগুলিকে HEX দিয়ে লেবেল করা হয়) ডিজাইন করা হয়েছে। নমুনা সংগ্রহ, RNA এবং PCR অ্যামপ্লিফিকেশন প্রক্রিয়া পর্যবেক্ষণ করার জন্য কিটটিতে একটি এন্ডোজেনাস ইন্টারনাল কন্ট্রোল ডিটেকশন সিস্টেম (CY5 দিয়ে লেবেল করা অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ জিন প্রোব)ও রয়েছে, যার ফলে মিথ্যা নেতিবাচক ফলাফল হ্রাস পায়।
প্রধান উপাদান
| উপাদান | আয়তন（৪৮টি/কিট) |
| আরটি-পিসিআর বিক্রিয়া সমাধান | ৯৬µলিটার |
| nCOV প্রাইমার TaqMan প্রোবিমিক্সচার (ORF1ab, N জিন, RnaseP জিন) | ৮৬৪µলিটার |
| নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ | ১৫০০µলি |
| nCOV পজিটিভ কন্ট্রোল (l ORF1ab N Gene) | ১৫০০µলি |
নিজস্ব বিকারক: RNA নিষ্কাশন বা পরিশোধন বিকারক। নেতিবাচক/ধনাত্মক নিয়ন্ত্রণ: ধনাত্মক নিয়ন্ত্রণ হল লক্ষ্য খণ্ড ধারণকারী RNA, যখন নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হল নিউক্লিক অ্যাসিড-মুক্ত জল। ব্যবহারের সময়, তাদের নিষ্কাশনে অংশগ্রহণ করা উচিত এবং সংক্রামক হিসাবে বিবেচিত হওয়া উচিত। প্রাসঙ্গিক নিয়ম অনুসারে এগুলি পরিচালনা এবং নিষ্পত্তি করা উচিত।
অভ্যন্তরীণ রেফারেন্স জিন হল মানব RnaseP জিন।
স্টোরেজ শর্ত এবং মেয়াদ শেষ হওয়ার তারিখ
-২০±৫℃, ৫ বারের বেশি বারবার জমাট বাঁধা এবং গলানো এড়িয়ে চলুন, ৬ মাসের জন্য বৈধ।
প্রযোজ্য উপকরণ
FAM / HEX / CY5 এবং অন্যান্য মাল্টি-চ্যানেল ফ্লুরোসেন্ট পিসিআর যন্ত্রের সাহায্যে।
নমুনার প্রয়োজনীয়তা
১.প্রযোজ্য নমুনার ধরণ: গলার সোয়াব, নাসোফ্যারিঞ্জিয়াল সোয়াব, ব্রঙ্কোঅ্যালভিওলার ল্যাভেজ ফ্লুইড, থুতনি।
২. নমুনা সংগ্রহ (অ্যাসেপটিক কৌশল)
ফ্যারিঞ্জিয়াল সোয়াব: একই সময়ে দুটি সোয়াব দিয়ে টনসিল এবং পিছনের ফ্যারিঞ্জিয়াল প্রাচীর মুছে ফেলুন, তারপর স্যাম্পলিং দ্রবণ ধারণকারী একটি টেস্ট টিউবে সোয়াব হেডটি ডুবিয়ে দিন।
থুতনি: রোগীর গভীর কাশি হওয়ার পর, থুতনি সংগ্রহ করুন একটি স্ক্রু ক্যাপ টেস্ট টিউবে যাতে নমুনা দ্রবণ থাকে; ব্রঙ্কোঅ্যালভিওলার ল্যাভেজ তরল: চিকিৎসা পেশাদারদের দ্বারা নমুনা সংগ্রহ। 3. নমুনা সংরক্ষণ এবং পরিবহন।
ভাইরাস বিচ্ছিন্নকরণ এবং আরএনএ পরীক্ষার জন্য নমুনাগুলি যত তাড়াতাড়ি সম্ভব পরীক্ষা করা উচিত। যে নমুনাগুলি 24 ঘন্টার মধ্যে সনাক্ত করা যায় সেগুলি 4℃ তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা যেতে পারে; যেগুলি 24 ঘন্টার মধ্যে সনাক্ত করা যায় না সেগুলি
ঘন্টা -70℃ বা তার কম তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা উচিত (যদি -70℃ এর কোন স্টোরেজ অবস্থা না থাকে, তাহলে সেগুলি হওয়া উচিত
(অস্থায়ীভাবে -২০℃ রেফ্রিজারেটরে সংরক্ষণ করা উচিত)। পরিবহনের সময় নমুনাগুলি বারবার জমাট বাঁধা এবং গলানো এড়ানো উচিত। সংগ্রহের পরে যত তাড়াতাড়ি সম্ভব নমুনাগুলি পরীক্ষাগারে পাঠানো উচিত। যদি নমুনাগুলি দীর্ঘ দূরত্বে পরিবহনের প্রয়োজন হয়, তবে শুকনো বরফ সংরক্ষণের পরামর্শ দেওয়া হয়।
পরীক্ষা পদ্ধতি
১ নমুনা প্রক্রিয়াকরণ এবং আরএনএ নিষ্কাশন (নমুনা প্রক্রিয়াকরণ এলাকা)
RNA নিষ্কাশনের জন্য 200μl তরল নমুনা নেওয়ার পরামর্শ দেওয়া হয়। সম্পর্কিত নিষ্কাশন পদক্ষেপের জন্য, বাণিজ্যিক RNA নিষ্কাশন কিটের নির্দেশাবলী পড়ুন। নেতিবাচক এবং নেতিবাচক উভয়ই
এই কিটের নিয়ন্ত্রণগুলি নিষ্কাশনের সাথে জড়িত ছিল।
২ পিসিআর রিএজেন্ট প্রস্তুতি (রিএজেন্ট প্রস্তুতি এলাকা)
২.১ কিট থেকে সমস্ত উপাদান বের করে নিন এবং গলান এবং ঘরের তাপমাত্রায় মিশ্রিত করুন। ব্যবহারের আগে কয়েক সেকেন্ডের জন্য 8,000 rpm এ সেন্ট্রিফিউজ করুন; প্রয়োজনীয় পরিমাণে বিকারক গণনা করুন, এবং নিম্নলিখিত টেবিলে দেখানো হিসাবে বিক্রিয়া ব্যবস্থা প্রস্তুত করা হয়:
| উপাদান | এন সার্ভিং (২৫µl সিস্টেম) |
| nCOV প্রাইমার TaqMan প্রোবিমিক্সচার | ১৮ µl × N |
| আরটি-পিসিআর বিক্রিয়া সমাধান | ২ µl × N |
| *N = পরীক্ষিত নমুনার সংখ্যা + ১ (নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ) + ১ (nCOV)ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ) | |
২.২ উপাদানগুলো পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে মিশ্রিত করার পর, অল্প সময়ের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করুন যাতে টিউবের দেয়ালের সমস্ত তরল টিউবের নীচে পড়ে যায়, এবং তারপর ২০ µl অ্যামপ্লিফিকেশন সিস্টেমটি পিসিআর টিউবে অ্যালিকোট করুন।
৩ নমুনা সংগ্রহ (নমুনা প্রস্তুতির ক্ষেত্র)
নিষ্কাশনের পর 5μl নেতিবাচক এবং ধনাত্মক নিয়ন্ত্রণ যোগ করুন। পরীক্ষা করা নমুনার RNA PCR বিক্রিয়া নলটিতে যোগ করা হয়।
টিউবটি শক্ত করে বন্ধ করুন এবং কয়েক সেকেন্ডের জন্য 8,000 rpm এ সেন্ট্রিফিউজ করুন এবং তারপর এটিকে অ্যামপ্লিফিকেশন ডিটেকশন এরিয়ায় স্থানান্তর করুন।
৪ পিসিআর পরিবর্ধন (পরিবর্ধিত সনাক্তকরণ এলাকা)
৪.১ যন্ত্রের নমুনা কোষে বিক্রিয়া নলটি স্থাপন করুন এবং নিম্নরূপ পরামিতিগুলি সেট করুন:
| মঞ্চ | চক্র সংখ্যা | তাপমাত্রা(°সে) | সময় | সংগ্রহসাইট |
| বিপরীতপ্রতিলিপি | 1 | 42 | ১০ মিনিট | - |
| প্রাক-বিকৃতকরণn | 1 | 95 | ১ মিনিট | - |
| চক্র | 45 | 95 | ১৫ সেকেন্ড | - |
| 60 | ৩০ এর দশক | তথ্য সংগ্রহ |
যন্ত্র সনাক্তকরণ চ্যানেল নির্বাচন: ফ্লুরোসেন্স সিগন্যালের জন্য FAM、HEX、CY5 চ্যানেল নির্বাচন করুন। রেফারেন্সের জন্য ফ্লুরোসেন্ট NONE, অনুগ্রহ করে ROX নির্বাচন করবেন না।
৫ ফলাফল বিশ্লেষণ (সেটিং এর জন্য প্রতিটি যন্ত্রের পরীক্ষামূলক নির্দেশাবলী দেখুন)
প্রতিক্রিয়ার পরে, ফলাফলগুলি সংরক্ষণ করুন। বিশ্লেষণের পরে, লগারিদমিক গ্রাফে চিত্র অনুসারে বেসলাইনের প্রারম্ভিক মান, শেষ মান এবং প্রান্তিক মান সামঞ্জস্য করুন (ব্যবহারকারী প্রকৃত পরিস্থিতি অনুসারে সামঞ্জস্য করতে পারেন, শুরুর মান 3~15 এ সেট করা যেতে পারে, শেষ মান 5~20 এ সেট করা যেতে পারে, সমন্বয়) উইন্ডোর থ্রেশহোল্ডে, প্রান্তিক রেখা লগারিদমিক পর্যায়ে থাকে এবং নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণের পরিবর্ধন বক্ররেখা একটি সরল রেখা বা প্রান্তিক রেখার নীচে থাকে)।
৬. কোয়াটি নিয়ন্ত্রণ (পরীক্ষায় একটি পদ্ধতিগত নিয়ন্ত্রণ অন্তর্ভুক্ত)। নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ: FAM, HEX, CY5 সনাক্তকরণ চ্যানেলের জন্য কোনও স্পষ্ট পরিবর্ধন বক্ররেখা নেই।
COV পজিটিভ নিয়ন্ত্রণ: FAM এবং HEX সনাক্তকরণ চ্যানেলের স্পষ্ট পরিবর্ধন বক্ররেখা, Ct মান≤32, কিন্তু CY5 চ্যানেলের কোনও পরিবর্ধন বক্ররেখা নেই;
উপরের প্রয়োজনীয়তাগুলি একই পরীক্ষায় একই সাথে পূরণ করতে হবে; অন্যথায়, পরীক্ষাটি অবৈধ এবং পুনরাবৃত্তি করতে হবে।
৭ ফলাফল নির্ধারণ।
৭.১ যদি পরীক্ষার নমুনার FAM এবং HEX চ্যানেলে কোনও পরিবর্ধন বক্ররেখা বা Ct মান> ৪০ না থাকে এবং CY5 চ্যানেলে একটি পরিবর্ধন বক্ররেখা থাকে, তাহলে বিচার করা যেতে পারে যে নমুনায় কোনও ২০১৯ সালের নতুন করোনাভাইরাস (২০১৯-nCoV) RNA নেই;
.2 যদি পরীক্ষার নমুনায় FAM এবং HEX চ্যানেলে স্পষ্ট পরিবর্ধন বক্ররেখা থাকে এবং Ct মান ≤40 হয়, তাহলে বিচার করা যেতে পারে যে নমুনাটি 2019 সালের নতুন করোনাভাইরাস (2019-nCoV) এর জন্য ইতিবাচক।
৭.৩ যদি পরীক্ষার নমুনায় শুধুমাত্র FAM বা HEX এর একটি চ্যানেলে স্পষ্ট পরিবর্ধন বক্ররেখা থাকে এবং Ct মান ≤40 হয়, এবং অন্য চ্যানেলে কোনও পরিবর্ধন বক্ররেখা না থাকে, তাহলে ফলাফলগুলি পুনরায় পরীক্ষা করতে হবে। যদি পুনঃপরীক্ষার ফলাফল সামঞ্জস্যপূর্ণ হয়, তাহলে নমুনাটি নতুনের জন্য ইতিবাচক বলে বিচার করা যেতে পারে।
করোনাভাইরাস ২০১৯ (২০১৯-nCoV)। যদি পুনঃপরীক্ষার ফলাফল নেতিবাচক হয়, তাহলে বিচার করা যেতে পারে যে নমুনাটি ২০১৯ সালের নতুন করোনাভাইরাস (২০১৯-nCoV) এর জন্য নেতিবাচক।
ইতিবাচক রায় মান
কিটের রেফারেন্স CT মান নির্ধারণ করতে ROC কার্ভ পদ্ধতি ব্যবহার করা হয় এবং অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ রেফারেন্স মান 40।
পরীক্ষার ফলাফলের ব্যাখ্যা
১. প্রতিটি পরীক্ষায় নেতিবাচক এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণের জন্য পরীক্ষা করা উচিত। পরীক্ষার ফলাফল কেবল তখনই নির্ধারণ করা যেতে পারে যখন নিয়ন্ত্রণগুলি মান নিয়ন্ত্রণের প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে।
২. যখন FAM এবং HEX সনাক্তকরণ চ্যানেলগুলি ইতিবাচক হয়, তখন সিস্টেম প্রতিযোগিতার কারণে CY5 চ্যানেল (অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ চ্যানেল) থেকে ফলাফল নেতিবাচক হতে পারে।
৩. যখন অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ ফলাফল নেতিবাচক হয়, যদি টেস্ট টিউবের FAM এবং HEX সনাক্তকরণ চ্যানেলগুলিও নেতিবাচক হয়, তাহলে এর অর্থ হল সিস্টেমটি অক্ষম বা অপারেশনটি ভুল, পরীক্ষাটি অবৈধ। অতএব, নমুনাগুলি পুনরায় পরীক্ষা করা প্রয়োজন।
