পণ্য
2019-nCoV-এর জন্য Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR সনাক্তকরণ কিট
প্রত্যাশিত ব্যবহার
এই কিটটি নতুন করোনাভাইরাস (2019-nCoV) এর গুণগত সনাক্তকরণের জন্য ব্যবহার করা হয় গলার সোয়াব, নাসোফ্যারিঞ্জিয়াল সোয়াব, ব্রঙ্কোয়ালভিওলার ল্যাভেজ ফ্লুইড, থুতু। ক্লিনিকাল রোগ নির্ণয় এবং চিকিত্সার জন্য প্রমাণ। রোগীর ক্লিনিকাল প্রকাশ এবং অন্যান্য পরীক্ষাগার পরীক্ষার সাথে সমন্বয় করে অবস্থার একটি বিস্তৃত বিশ্লেষণের সুপারিশ করা হয়।
পরিদর্শন নীতি
কিটটি এক-ধাপে RT-PCR প্রযুক্তির উপর ভিত্তি করে তৈরি।প্রকৃতপক্ষে, 2019 নতুন করোনভাইরাস (2019-nCoV) ORF1ab এবং N জিনগুলিকে পরিবর্ধন লক্ষ্য অঞ্চল হিসাবে নির্বাচিত করা হয়েছিল।নির্দিষ্ট প্রাইমার এবং ফ্লুরোসেন্ট প্রোবগুলি (N জিন প্রোবগুলিকে FAM দিয়ে লেবেল করা হয় এবং ORF1ab প্রোবগুলিকে HEX দিয়ে লেবেল করা হয়) নমুনাগুলিতে 2019 নতুন ধরণের করোনভাইরাস আরএনএ সনাক্ত করার জন্য ডিজাইন করা হয়েছে৷নমুনা সংগ্রহ, আরএনএ এবং পিসিআর পরিবর্ধনের প্রক্রিয়া নিরীক্ষণের জন্য কিটটিতে একটি অন্তঃসত্ত্বা অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ সনাক্তকরণ ব্যবস্থা (সিওয়াই 5 লেবেলযুক্ত অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ জিন প্রোব) অন্তর্ভুক্ত রয়েছে, যার ফলে মিথ্যা নেতিবাচক ফলাফলগুলি হ্রাস পায়।
প্রধান উপাদান
| উপাদান | আয়তন(48T/কিট) |
| RT-PCR প্রতিক্রিয়া সমাধান | 96µl |
| nCOV প্রাইমার TaqMan প্রোবিমিক্সচার (ORF1ab, N জিন, RnaseP জিন) | 864µl |
| নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ | 1500µl |
| nCOV পজিটিভ কন্ট্রোল (l ORF1ab N Gene) | 1500µl |
নিজস্ব বিকারক: আরএনএ নিষ্কাশন বা পরিশোধন বিকারক।নেতিবাচক/ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ: ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হল লক্ষ্য টুকরা ধারণকারী RNA, যখন নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হল নিউক্লিক অ্যাসিড-মুক্ত জল।ব্যবহারের সময়, তাদের নিষ্কাশনে অংশগ্রহণ করা উচিত এবং সংক্রামক হিসাবে বিবেচিত হওয়া উচিত।প্রাসঙ্গিক প্রবিধান অনুযায়ী তাদের পরিচালনা এবং নিষ্পত্তি করা উচিত।
অভ্যন্তরীণ রেফারেন্স জিন হল মানব RnaseP জিন।
স্টোরেজ শর্ত এবং মেয়াদ শেষ হওয়ার তারিখ
-20±5℃, বারবার জমাট বাঁধা এবং 5 বারের বেশি গলানো এড়িয়ে চলুন, 6 মাসের জন্য বৈধ।
প্রযোজ্য যন্ত্র
FAM/HEX/CY5 এবং অন্যান্য মাল্টি-চ্যানেল ফ্লুরোসেন্ট পিসিআর যন্ত্র সহ।
নমুনা প্রয়োজনীয়তা
1.প্রযোজ্য নমুনার ধরন: গলার সোয়াব, নাসোফ্যারিঞ্জিয়াল সোয়াব, ব্রঙ্কোয়ালভিওলার ল্যাভেজ ফ্লুইড, স্পুটাম।
2. নমুনা সংগ্রহ (অ্যাসেপটিক কৌশল)
ফ্যারিঞ্জিয়াল সোয়াব: একই সময়ে দুটি সোয়াব দিয়ে টনসিল এবং পোস্টেরিয়র ফ্যারিঞ্জিয়াল প্রাচীর মুছুন, তারপর স্যাম্পলিং দ্রবণ ধারণকারী একটি টেস্ট টিউবে সোয়াবের মাথাটি ডুবিয়ে দিন।
থুতু: রোগীর গভীর কাশি হওয়ার পরে, স্যাম্পলিং দ্রবণ ধারণকারী একটি স্ক্রু ক্যাপ টেস্ট টিউবে কাশিযুক্ত থুতু সংগ্রহ করুন;ব্রঙ্কোয়ালভিওলার ল্যাভেজ ফ্লুইড: মেডিকেল পেশাদারদের দ্বারা নমুনা।3. সঞ্চয়স্থান এবং নমুনা পরিবহন
ভাইরাস বিচ্ছিন্নতা এবং আরএনএ পরীক্ষার জন্য নমুনা যত তাড়াতাড়ি সম্ভব পরীক্ষা করা উচিত।24 ঘন্টার মধ্যে সনাক্ত করা যায় এমন নমুনাগুলি 4℃ এ সংরক্ষণ করা যেতে পারে;যেগুলি 24 এর মধ্যে সনাক্ত করা যায় না
ঘন্টাগুলি -70 ℃ বা নীচে সংরক্ষণ করা উচিত (যদি -70 ℃ এর কোন স্টোরেজ শর্ত না থাকে তবে সেগুলি হওয়া উচিত
অস্থায়ীভাবে -20℃ রেফ্রিজারেটরে সংরক্ষণ করা হয়)।নমুনাগুলি পরিবহনের সময় বারবার জমাট বাঁধা এবং গলানো এড়াতে হবে।নমুনা সংগ্রহের পর যত তাড়াতাড়ি সম্ভব পরীক্ষাগারে পাঠাতে হবে।যদি নমুনাগুলি দীর্ঘ দূরত্বে পরিবহন করার প্রয়োজন হয় তবে শুকনো বরফ সংরক্ষণের পরামর্শ দেওয়া হয়।
পরীক্ষণ পদ্ধতি
1 নমুনা প্রক্রিয়াকরণ এবং আরএনএ নিষ্কাশন (নমুনা প্রক্রিয়াকরণ এলাকা)
RNA নিষ্কাশনের জন্য 200μl তরল নমুনা নেওয়ার পরামর্শ দেওয়া হয়।সম্পর্কিত নিষ্কাশন পদক্ষেপের জন্য, বাণিজ্যিক RNA নিষ্কাশন কিটগুলির নির্দেশাবলী পড়ুন।নেতিবাচক এবং নেতিবাচক উভয়ই
এই কিট নিয়ন্ত্রণ নিষ্কাশন জড়িত ছিল.
2 পিসিআর বিকারক প্রস্তুতি (বিকারক প্রস্তুত এলাকা)
2.1 কিট থেকে সমস্ত উপাদান সরান এবং গলিয়ে নিন এবং ঘরের তাপমাত্রায় মিশ্রিত করুন।ব্যবহারের আগে কয়েক সেকেন্ডের জন্য 8,000 rpm-এ সেন্ট্রিফিউজ;প্রয়োজনীয় পরিমাণ বিকারক গণনা করুন, এবং প্রতিক্রিয়া সিস্টেমটি নিম্নলিখিত টেবিলে দেখানো হিসাবে প্রস্তুত করা হয়েছে:
| উপাদান | N পরিবেশন (25µl সিস্টেম) |
| nCOV প্রাইমার TaqMan প্রোবিমিক্সচার | 18 µl × N |
| RT-PCR প্রতিক্রিয়া সমাধান | 2 µl × N |
| *N = পরীক্ষিত নমুনার সংখ্যা + 1 (নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ) + 1 (nCOVইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ) | |
2.2 উপাদানগুলি পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে মিশ্রিত করার পরে, টিউব প্রাচীরের সমস্ত তরল টিউবের নীচে পড়তে দেওয়ার জন্য অল্প সময়ের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করুন এবং তারপরে পিসিআর টিউবে 20 μl অ্যামপ্লিফিকেশন সিস্টেমটি অ্যালিকোট করুন।
3 নমুনা (নমুনা প্রস্তুত এলাকা)
নিষ্কাশনের পরে নেতিবাচক এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণের 5μl যোগ করুন।নমুনার আরএনএ পরীক্ষা করার জন্য পিসিআর প্রতিক্রিয়া টিউবে যোগ করা হয়।
টিউবটিকে শক্তভাবে ঢেকে রাখুন এবং পরিবর্ধন সনাক্তকরণ এলাকায় স্থানান্তর করার আগে কয়েক সেকেন্ডের জন্য 8,000 rpm-এ সেন্ট্রিফিউজ করুন।
4 পিসিআর পরিবর্ধন (পরিবর্ধিত সনাক্তকরণ এলাকা)
4.1 যন্ত্রের নমুনা কক্ষে প্রতিক্রিয়া টিউব রাখুন, এবং নিম্নরূপ পরামিতি সেট করুন:
| মঞ্চ | সাইকেল সংখ্যা | তাপমাত্রা(°সে) | সময় | সংগ্রহসাইট |
| বিপরীতপ্রতিলিপি | 1 | 42 | 10 মিনিট | - |
| প্রি-ডিনাচুরেশনn | 1 | 95 | 1 মিনিট | - |
| সাইকেল | 45 | 95 | 15 সেকেন্ড | - |
| 60 | 30s | তথ্য সংগ্রহ |
যন্ত্র সনাক্তকরণ চ্যানেল নির্বাচন: ফ্লুরোসেন্স সংকেতের জন্য FAM、HEX、CY5 চ্যানেল নির্বাচন করুন৷রেফারেন্স ফ্লুরোসেন্ট NONE জন্য, অনুগ্রহ করে ROX নির্বাচন করবেন না।
5 ফলাফল বিশ্লেষণ (সেটিং করার জন্য প্রতিটি যন্ত্রের পরীক্ষামূলক নির্দেশাবলী দেখুন)
প্রতিক্রিয়া পরে, ফলাফল সংরক্ষণ করুন.বিশ্লেষণের পরে, চিত্র অনুসারে বেসলাইনের প্রারম্ভিক মান, শেষ মান এবং প্রান্তিক মান সামঞ্জস্য করুন (ব্যবহারকারী প্রকৃত পরিস্থিতি অনুসারে সামঞ্জস্য করতে পারে, শুরুর মান 3 ~ 15 সেট করা যেতে পারে, শেষের মান সেট করা যেতে পারে লগারিদমিক গ্রাফে 5~20, সমন্বয়) উইন্ডোর থ্রেশহোল্ডে, থ্রেশহোল্ড লাইন লগারিদমিক পর্যায়ে থাকে এবং নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণের পরিবর্ধন বক্ররেখা একটি সরল রেখা বা থ্রেশহোল্ড লাইনের নীচে)।
6 কোয়াটি নিয়ন্ত্রণ（পরীক্ষায় একটি পদ্ধতিগত নিয়ন্ত্রণ অন্তর্ভুক্ত） নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ: FAM, HEX, CY5 সনাক্তকরণ চ্যানেলের জন্য কোনো সুস্পষ্ট পরিবর্ধন বক্ররেখা নেই
COV পজিটিভ নিয়ন্ত্রণ: FAM এবং HEX সনাক্তকরণ চ্যানেলের সুস্পষ্ট পরিবর্ধন বক্ররেখা, Ct value≤32, কিন্তু CY5 চ্যানেলের কোনো পরিবর্ধন বক্ররেখা নেই;
উপরের প্রয়োজনীয়তাগুলি একই পরীক্ষায় একই সাথে পূরণ করতে হবে;অন্যথায়, পরীক্ষাটি অবৈধ এবং পুনরাবৃত্তি করা প্রয়োজন।
7 ফলাফল নির্ধারণ.
7.1 যদি পরীক্ষার নমুনার FAM এবং HEX চ্যানেলে কোনো পরিবর্ধন বক্ররেখা বা Ct মান> 40 না থাকে এবং CY5 চ্যানেলে একটি পরিবর্ধন বক্ররেখা থাকে, তাহলে বিচার করা যেতে পারে যে কোনো 2019 নতুন করোনাভাইরাস নেই (2019-nCoV) নমুনায় আরএনএ;
.2 যদি পরীক্ষার নমুনায় FAM এবং HEX চ্যানেলে সুস্পষ্ট পরিবর্ধন বক্ররেখা থাকে এবং Ct মান ≤40 হয়, তাহলে বিচার করা যেতে পারে যে নমুনাটি 2019 সালের নতুন করোনাভাইরাস (2019-nCoV) এর জন্য ইতিবাচক।
7.3 যদি পরীক্ষার নমুনায় শুধুমাত্র FAM বা HEX-এর একটি চ্যানেলে একটি স্পষ্ট পরিবর্ধন বক্ররেখা থাকে এবং Ct মান ≤40 হয়, এবং অন্য চ্যানেলে কোনো পরিবর্ধন বক্ররেখা না থাকে, ফলাফলগুলি পুনরায় পরীক্ষা করা প্রয়োজন।যদি পুনরায় পরীক্ষার ফলাফলগুলি সামঞ্জস্যপূর্ণ হয়, তাহলে নমুনাটি নতুনের জন্য ইতিবাচক বলে বিচার করা যেতে পারে
করোনাভাইরাস 2019 (2019-nCoV)।যদি পুনরায় পরীক্ষার ফলাফল নেতিবাচক হয়, তবে এটি বিচার করা যেতে পারে যে নমুনাটি 2019 নতুন করোনাভাইরাস (2019-nCoV) এর জন্য নেতিবাচক।
ইতিবাচক রায় মান
ROC বক্ররেখা পদ্ধতিটি কিটের রেফারেন্স সিটি মান নির্ধারণ করতে ব্যবহৃত হয় এবং অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ রেফারেন্স মান 40 হয়।
পরীক্ষার ফলাফলের ব্যাখ্যা
1.প্রতিটি পরীক্ষা নেতিবাচক এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণের জন্য পরীক্ষা করা উচিত।পরীক্ষার ফলাফল শুধুমাত্র তখনই নির্ধারণ করা যেতে পারে যখন নিয়ন্ত্রণগুলি মান নিয়ন্ত্রণের প্রয়োজনীয়তা পূরণ করে
2. যখন FAM এবং HEX সনাক্তকরণ চ্যানেলগুলি ইতিবাচক হয়, তখন সিস্টেম প্রতিযোগিতার কারণে CY5 চ্যানেল (অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ চ্যানেল) থেকে ফলাফল নেতিবাচক হতে পারে।
3. যখন অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণের ফলাফল নেতিবাচক হয়, যদি টেস্ট টিউবের FAM এবং HEX সনাক্তকরণ চ্যানেলগুলিও নেতিবাচক হয়, , এর মানে হল যে সিস্টেমটি অক্ষম বা অপারেশন ভুল, টি পরীক্ষাটি অবৈধ৷অতএব, নমুনাগুলি পুনরায় পরীক্ষা করা দরকার।
